◆ 非洲豬瘟ASF的由來：

    非洲豬瘟(African suwinefever,ASF)是由非洲豬瘟病毒感染家豬和野豬后產生的一種烈性傳染病。此次疫情來勢迅猛，從2018年8月首次傳入我國后便飛速席卷養豬業，帶來了不可預估的經濟損失。非洲瘟病毒是一種具有囊膜結構的雙鏈DNA病毒，感染家豬和野豬后引起高熱出血和死亡。目前PCR方法被指定用于非洲豬瘟病毒的檢測，其具有高靈敏度、高特異性、快速的特點。

    在此，通過實際的案例，與大家分享合作公司組合的高效靠譜的非洲豬瘟病毒檢測方案。

　◆ 非洲豬瘟感染組織樣本的前處理：

    非洲豬瘟的易感對象是家豬、野豬，通常采集的樣本為血漿和組織。對于組織樣本來說，在核酸提取前需要進行充分研磨破碎，保證核酸充分釋放，提取核酸后用于后續檢測，若無充分研磨可能會造成核酸檢測的假陰性結果。使用DHFSTPRP系列全自動樣品快速研磨機，升級了更強的動力，改進了研磨方式，樣本在全封閉狀態下裂解避免樣品間的交叉污染以及外界污染，在保證樣本安全的前提下使樣品研磨更充分、徹底，研磨效果穩定；有多種規格適配器、研磨珠和研磨罐，可同時快速處理24-64個組織樣本，液晶顯示屏可儲存10條數據。更有DHFSTPRP-II系列液氮冷凍研磨機，真正的全自動冷凍研磨，低溫達到-196℃，可輕松處理熱敏感性樣本及難研磨樣本。

◆ 非洲豬瘟感染組織樣本核酸提取：

    TGuide S32自動核酸提取儀采用最新磁棒吸附轉移核酸純化方式，利用96深孔反應板，搭配不同種類的磁珠法核酸提取試劑，同時操作1-32個樣本，從血液、細胞、組織、病毒等多種樣本中自動分離提取純化核酸。

    儀器通過特制的磁棒高效吸附、轉移和釋放磁珠，磁珠回收效率：≥98%，核酸得率更高；液體處理體積：20-1000μl，多檔可調振動速度，溶液體積自適應振動幅度，振動幅度根據溶液體積自動調整保證裂解效果；配備交叉污染控制系統與紫外滅菌模塊，有效避免孔間及板間交叉污染；同時優化加熱槽位設計，核酸回收體積更為準確。

◆ 高敏及高特異性的熒光定量PCR檢測：

    儀器通過特制的磁棒高效吸附、轉移和釋放磁珠，磁珠回收效率：≥98%，核酸得率更高；液體處理體積：20-1000μl，多檔可調振動速度，溶液體積自適應振動幅度，振動幅度根據溶液體積自動調整保證裂解效果；配備交叉污染控制系統與紫外滅菌模塊，有效避免孔間及板間交叉污染；同時優化加熱槽位設計，核酸回收體積更為準確。

    終點法PCR和實時熒光定量PCR均可以檢測PCR產物的量，從而推斷初始模板的含量。由于凝膠成像方法本身靈敏度的局限，實時熒光定量PCR熒光染料的加入，使儀器對于整個PCR反應進行實時監控，準確性更高。

    寧波中道非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒（B盒）是一款基于熒光探針的熒光定量檢測試劑盒，主要用于檢測疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒（ASFV，African Swine Fever Virus）核酸，適用于非洲豬瘟病毒的檢測、診斷和流行病學調查。

    試劑盒-20°進行保存，有限期為12個月，盒內提供陰性及陽性對照，對于整個實驗進行質量監控。在第一批非洲豬瘟現場快速檢測試劑評價結果中，鄭州中道非洲豬瘟熒光定量PCR快速檢測試劑盒在診斷敏感性和診斷特異性上均表現優異。

◆ 熒光定量檢測儀器：羅氏全能熒光定量PCR儀：

    羅氏Light Cycler 96熒光定量PCR儀是全波長，高光強的PCR儀，高性價比，超長使用壽命，所有樣本同時檢測且高重復性，采用業內獨有的光纖導光，避免光信號的損失；運用LightCycler 480上受好評的銀質溫控模塊，導熱性快速均一，孔間溫控差異±0.2°，升溫速度4.4°/s，降溫速度2.2°/s，96孔檢測≤40min（35 Cyclers），較許多機型可節省一半的時間。Light Cycler 96可靈敏檢測單拷貝基因，拷貝數差異≤1.5倍，置信度≥99.8%，且無需無需ROX等被動染料校正，方便快捷性能穩定。

◆ 小體系上樣操作工具：eppendorf移液器：

小貼士：

    實時熒光定量PCR通常為小體系實驗，對于微量樣本來說特別是1-10ul上樣操作會出險移液吹打不凈現象，精準移液是準確結果的重要要素，因此推薦使用Eppendorf Reference2系列移液器搭配原裝進口吸頭進行移液操作和聯系昆騰戰隊工程師做移液操作專場講座，為結果的準確性保駕護航。

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